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p53抗體的應用誤區(qū)
來源: | 作者:prodb2f2b | 發(fā)布時間: 2019-02-19 | 1513 次瀏覽 | 分享到:

筆者最近看到有病理學研究工作人員對p53抗體的應用存在概念混淆,即把常見的p53抗體直接當作突變型p53的抗體。造成這種誤解的原因一方面主要與研究人員對一些基礎分子學病理學與抗體工程學的認知不足有關,另外一方面也與p53分子本身的一些特點有關。

從上世紀八九十年代開始人們逐步認識到p53分子重要性之后,曾出現(xiàn)過一些列的單克隆抗體如:PAb248、PAb421、PAb1801、DO-7、Bp53-12等。其中DO-7與Bp53-12兩個克隆最終脫穎而出。實際上這些抗體均針對的是總的p53分子,沒有區(qū)分突變型與野生型p53分子。近年出現(xiàn)的兔源單克隆抗體SP5也針對的是總的p53分子。針對突變型p53早期曾經(jīng)有抗體PAb-240,但該抗體在特異性方面并非理想。目前正在有商家推廣針對p53分子的突變型抗體,其使用效果還有待在科研實踐中考察。

實際上通過抗體對p53分子進行突變區(qū)分有一定難度,這是因為p53的幾個熱點突變位置比較分散(aa129~146、 171~179、234~260、270~287)。要想做到對幾個微點的突變都能辨認必須是多個抗體的組合使用。因此在沒有理想的抗體解決方案之前,建議國內(nèi)臨床相關科研工作者盡量采用基因檢測的方法確定p53的突變情況。

造成科研工作者容易把常見p53抗體認為是突變型p53的另一重要原因是p53分子的自身特點。P53分子作為“基因組守衛(wèi)者”是廣泛表達在各種組織的細胞中,但因p53分子半衰期很短(約10-20分鐘)故通常情況下難以通過免疫組織化學(IHC)的方法檢測出。而突變型p53半衰期明顯延長,往往能夠通過IHC檢測到。因此人們習慣于將IHC檢出的p53分子認為是突變型p53。

目前通過IHC檢出的p53與突變型p53二者之間盡管有正相關關系,但二者之間絕不能混淆概念。例如在HPV病毒感染狀態(tài)下p53會與病原蛋白結合而避免被降解;此外,MDM2蛋白高表達也會阻斷p53的降解。在上述情況下p53可被IHC方法檢測出,其表達主要位于細胞核,其次在胞漿中也可見少量表達。因此,不能將IHC檢出p53與p53突變混為一談。

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